RESUMO Introdução: A doença de Fabry (DF) é um distúrbio causado por mutações no gene que codifica a enzima lisossômica α-galactosidase A (α-GAL). A redução da atividade de α-GAL leva ao acúmulo progressivo de globotriaosilceramida (Gb3), também conhecida como CD77. O recente relato de aumento da expressão de CD77 em células sanguíneas de pacientes com DF indicou que essa molécula pode ser utilizada como um potencial marcador para o monitoramento da terapia de reposição enzimática (TRE). Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de CD77 ao longo da TRE em pacientes com DF (mutação V269M). Métodos: Foram avaliadas as flutuações na expressão de CD77 nas membranas das CMSP (células mononucleares do sangue periférico) em pacientes com DF submetidos à TRE e correlacionados com aqueles observados em diferentes tipos de células. Resultados: Uma maior expressão de CD77 foi encontrada em fagócitos de pacientes em comparação aos controles no início do estudo. Curiosamente, a variabilidade nos níveis de CD77 é maior em pacientes no início do estudo (340 - 1619 MIF) e após 12 meses de TRE (240 - 530 MIF) em comparação com o grupo controle (131 - 331 MFI). Além disso, analisando os níveis de CD77 em fagócitos de pacientes ao longo da TRE, encontramos uma diminuição constante nos níveis de CD77. Conclusão: O aumento nos níveis de CD77 nos fagócitos de portadores de Fabry, juntamente com a diminuição nos níveis de CD77 ao longo da TRE, sugerem que medir os níveis de CD77 nos fagócitos é uma ferramenta promissora para monitorar a resposta à TRE na DF.

ABSTRACT Introduction: Fabry disease (FD) is a disorder caused by mutations in the gene encoding for lysosomal enzyme α-galactosidase A (α-GAL). Reduced α-GAL activity leads to progressive accumulation of globotriaosylceramide (Gb3), also known as CD77. The recent report of increased expression of CD77 in blood cells of patients with FD indicated that this molecule can be used as a potential marker for monitoring enzyme replacement therapy (ERT). Objective: The purpose of this study was to evaluate the CD77 levels throughout ERT in FD patients (V269M mutation). Methods: We evaluated the fluctuations in PBMC (peripheral blood mononuclear cell) membrane CD77 expression in FD patients undergoing ERT and correlated these levels with those observed in different cell types. Results: A greater CD77 expression was found in phagocytes of patients compared to controls at baseline. Interestingly, the variability in CD77 levels is larger in patients at baseline (340 - 1619 MIF) and after 12 months of ERT (240 - 530 MIF) compared with the control group (131 - 331 MFI). Furthermore, by analyzing the levels of CD77 in phagocytes from patients throughout ERT, we found a constant decrease in CD77 levels. Conclusion: The increased CD77 levels in the phagocytes of Fabry carriers together with the decrease in CD77 levels throughout ERT suggest that measuring CD77 levels in phagocytes is a promising tool for monitoring the response to ERT in FD.

Resumo Introdução: A doença de Fabry (DF) é uma desordem lisossômica ligada ao cromossomo X ocasionada por mutações no gene que codifica a enzima lisossômica α-galactosidase A (α-GAL). A redução ou ausência da atividade dessa enzima leva ao acúmulo progressivo de gb3. A doença renal é uma importante consequência clínica da acumulação de Gb3. Podócito é o tipo celular mais afetado na doença renal, que mostra apenas uma resposta parcial à Terapia de Reposição Enzimática. Além disso, a disfunção podocitária é a principal contribuinte para a perda progressiva da função renal e pode ser encontrada alterada mesmo antes do início da microalbuminúria. Assim, a podocitúria na DF pode ser uma ferramenta importante para prever a doença renal. Objetivo: O objetivo deste estudo foi quantificar a excreção urinária de podócitos em pacientes com DF (V269M, n = 14) e controles saudáveis (n = 40), e relacioná-las com as variáveis sexo, idade, tempo de terapia e a razão albumina: creatinina (AUC). Métodos: Podócitos urinários foram identificados utilizando imunofluorescência para podocalixina e DAPI. O número de células podocalixina positivo foi contado e o número médio foi utilizado (faixa normal 0-0.6 podócitos/mL). Resultados: O número médio de podócitos na urina de pacientes com DF foi significativamente maior do que os controles saudáveis (p < 0.0001). Observou-se uma correlação positiva entre podocitúria e AUC (p = 0.004; r2 = 0.6417). Conclusão: A podocitúria pode ser uma ferramenta adicional para avaliar a progressão da doença renal em pacientes que se espera que tenha um fenótipo mais agressivo.

Abstract Introduction: Fabry disease is a lysosomal storage disorder due to abnormalities in the GLA gene (Xq22). Such changes result in the reduction/absence of activity of the lysosome enzyme α-GAL, whose function is to metabolize globotriaosylceramide (Gb3). Renal disease is a major clinical outcome of the accumulation of Gb3. Podocyte injury is thought to be a major contributor to the progressive loss of the renal function and may be found altered even before the onset of microalbuminuria. Objective: The aim of this study was to quantify the urinary excretion of podocytes in Fabry disease patients (V269M, n = 14) and healthy controls (n = 40), and to correlate podocyturia with the variables gender, age, time of therapy and albumin: creatinine ratio (ACR). Methods: Urinary podocytes were stained using immunofluorescence to podocalyxin and DAPi. The number of podocalyxin-positive cells was quantified and the average number was taken (normal range 0-0.6 podocytes/mL). Results: The average number of podocytes in the urine of Fabry disease patients was significantly higher than in healthy controls (p < 0.0001). We observed a positive correlation between podocyturia and ACR (p = 0.004; (r2 = 0.6417). We found no correlation between podocyturia and gender, age or duration of therapy. Conclusion: Podocyturia is an important parameter in the assessment of renal disease in general, and it may serve as an additional early tool for monitoring Fabry disease nephropathy even before changes in ACR are seen. This may prove to be a useful tool to assess disease progression in patients expected to have a more aggressive phenotype.

Objetivo: relatar as frequências alélicas e haplotípicas do HLA-A, -B e -DRB1 de doadores voluntários de medula óssea (DVMO) do Rio Grande do Norte (RN), inscritos no Registro Nacional de Doadores de Medula Óssea (REDOME). Metodologia: 12.973 DVMO tiveram suas frequências alélica e haplotípica calculadas pelo programa Arlequin 3.5.1.2. Uma análise multivariada dos dados foi obtida por meio da Análise de Componente Principal (ACP) e da Análise de Cluster Hierárquico (ACH) realizadas pelo SPSS 8.0. Resultados: os grupos alélicos mais frequentes foram HLA-A*02, seguido por -DRB1*13, -DRB1*04, -DRB1*07, -B*44, -B*35, -A*24 e -DRB1*01. Dos 2.701 haplótipos observados, os três mais frequentes foram HLA-A*01 B*08 DRB1*03 (1,62%), -A*29 B*44 DRB1*07 (1,56%) e -A*02 B*44 DRB1*04 (1,29%), que se encontravam em desequilíbrio de ligação. As frequências alélicas e haplotípicas do RN são bastante similares às de outros estados brasileiros em que trabalhos semelhantes foram executados. A ACP revelou ser o RN geneticamente muito semelhante a populações caucasianas, especialmente a dos países ibéricos, os quais influenciaram fortemente na composição étnica do Estado. Africanos e ameríndios também contribuíram para a estrutura populacional, mas em menor proporção. Conclusão: a ACH reforçou a conclusão de que, apesar de seu perfil miscigenado, a população do RN se assemelha geneticamente com populações europeias e que descendem das europeias. A ACP também mostrou que as cidades do RN não contribuem equitativamente na composição do REDOME, de modo que cidades pouco populosas estão sub-representadas, apontando a necessidade de cadastrar mais DVMO dessas cidades para que a estrutura da população seja fielmente retratada.

Objective: this study aimed to report the allele and haplotype frequencies of volunteer bone marrow donors (VBMD) from the state of Rio Grande do Norte (RN) who were enrolled in the Brazilian Volunteer Bone Marrow Donor Registry (REDOME). Methods: the sample comprised 12,973 VBMD who had their allele and haplotype frequencies calculated by Arlequin 3.5.1.2. A multivariate analysis of the data was obtained through a principal component analysis (PCA) and hierarchical cluster analysis (HCA) performed with SPSS 8.0. Results: the most frequent allelic group was HLA-A*02, followed by -DRB1*13, -DRB1*04, -DRB1*07, -B*44, -B*35, -A*24 and -DRB1*01. Of the 2,701 haplotypes observed, the three most frequent were HLA-A*01 B*08 DRB1*03 (1.62%), -A*29 B*44 DRB1*07 (1.56%) and -A*02 B*44 DRB1*04 (1.29%). These haplotypes were in linkage disequilibrium. RN allele and haplotype frequencies were very similar to those in other Brazilian states in which similar studies have been performed. The PCA revealed that RN is highly genetically similar to Caucasian populations, especially those from Iberian countries, which strongly influenced the state’s ethnic composition. Africans and Amerindians also influenced the RN population structure, to a lesser extent. Conclusion: the HCA reinforced the conclusion that, despite its highly admixed profile, the RN population is genetically similar to European and European-descended populations. The PCA also showed that RN cities do not contribute to the same extent to REDOME, with less populous cities being underrepresented, indicating the need to enroll more VBMD from these smaller cities to faithfully depict the state’s population structure in the database.

OBJETIVO: Identificar as espécies de micobactérias encontradas no escarro de pacientes com suspeita de tuberculose pulmonar e analisar o impacto dessas identificações na abordagem terapêutica. MÉTODOS: Foram avaliados 106 pacientes com suspeita de tuberculose pulmonar encaminhados para o serviço de pneumologia de um hospital público em Teresina, Piauí. Espécimes de escarro matinal foram avaliados quanto à presença de micobactérias por baciloscopia e cultura. Foram utilizadas PCR e análise de restrição enzimática do gene hsp65 (PRA-hsp65) para a identificação das cepas de micobactérias isoladas em cultura. RESULTADOS: Foram analisadas 206 amostras de escarro. A idade dos pacientes variou de 15 a 87 anos, sendo 67% do gênero masculino. Tosse ocorreu em 100% dos casos. O padrão radiográfico predominante foi de lesão moderada, observada em 70%. A positividade no esfregaço foi de 76%, e isolamento em cultura ocorreu em 91% das culturas executadas. Testes tradicionais identificaram micobactérias não tuberculosas (MNT) em 9% dos isolados. O método PRA-hsp65 confirmou esses dados, mostrando sete padrões de bandas capazes de identificar as espécies de MNT isoladas: Mycobacterium kansasii; M. abscessus 1; M. abscessus 2; M. smegmatis; M. flavescens 1; M. gordonae 5 e M. gordonae 7. Todos os pacientes com MNT tinham mais de 60 anos, e observaram-se bronquiectasias em 88% das radiografias. Houve dois casos de reinfecção, identificados inicialmente como infecção por M. abscessus e M. kansasii. CONCLUSÕES: As MNT causam infecção pulmonar em pacientes imunocompetentes, e a identificação das MNT é importante para estabelecer o diagnóstico correto e a decisão terapêutica mais adequada. O método PRA-hsp65 é útil para identificar espécies de MNT e pode ser implantado em laboratórios de biologia molecular não especializados em micobactérias.

OBJECTIVE: To identify mycobacterial species in the sputum of patients suspected of having pulmonary tuberculosis and to determine the impact that the acquisition of this knowledge has on the therapeutic approach. METHODS: We evaluated 106 patients suspected of having pulmonary tuberculosis and referred to the pulmonology department of a public hospital in the city of Teresina, Brazil. Morning sputum specimens were evaluated for the presence of mycobacteria by sputum smear microscopy and culture. We used PCR and restriction enzyme analysis of the hsp65 gene (PRA-hsp65) to identify the strains of mycobacteria isolated in culture. RESULTS: A total of 206 sputum samples were analyzed. Patient ages ranged from 15 to 87 years, and 67% were male. There was cough in 100% of the cases. The predominant radiographic pattern was moderate disease, observed in 70%. Smear positivity was 76%, and isolation in culture occurred in 91% of the cultures. Traditional tests identified nontuberculous mycobacteria (NTM) in 9% of the isolates. The PRA-hsp65 method confirmed these data, showing seven band patterns that were able to identify the isolated species of NTM: Mycobacterium kansasii; M. abscessus 1; M. abscessus 2; M. smegmatis; M. flavescens 1; M. gordonae 5; and M. gordonae 7. All of the patients with NTM were over 60 years of age, and bronchiectasis was seen in 88% of the X-rays. There were two cases of reinfection, initially attributed to M. abscessus and M. kansasii. CONCLUSIONS: In immunocompetent patients, NTM can infect the lungs. It is important to identify the specific NTM in order to establish the correct diagnosis and choose the most appropriate therapeutic regimen. The PRA-hsp65 method is useful in identifying NTM species and can be implemented in molecular biology laboratories that do not specialize in the identification of mycobacteria.

Throughout Brazil, Cryptococcus neoformans is the cause of cryptococcosis, whereas Cryptococcus gattii is endemic to the northern and northeastern states. In this study, the molecular types of 63 cryptococcal isolates recovered from the cerebrospinal fluid of meningitis patients diagnosed between 2008-2010 in Teresina, Piauí, Brazil, were analysed. Out of the 63 patients, 37 (58.7%) were human immunodeficiency virus (HIV)-positive and 26 (41.3%) were HIV-negative. URA5-restriction fragment length polymorphism analysis identified 37/63 (58.7%) isolates as the C. neoformans VNI genotype, predominantly in HIV-positive patients (32/37, 86.5%), and 24/63 (38.1%) as the C. gattii VGII genotype, mostly in HIV-negative patients (21/26, 80.8%). The occurrence of C. gattii VGII in six apparently healthy children and in seven adolescents/young adults in this region reaffirms the endemic occurrence of C. gattii VGII-induced primary cryptococcosis and early cryptococcal infection. Lethality occurred in 18/37 (48.6%) of the HIV-positive subjects and in 13/26 (50%) of the HIV-negative patients. Our results provide new information on the molecular epidemiology of C. neoformans and C. gattii in Brazilian endemic areas.

OBJETIVO: Determinar as concentrações plasmáticas e eritrocitárias de zinco em idosos portadores e não-portadores de catarata senil em um serviço oftalmológico especializado, em Teresina-Piauí. MÉTODOS: Estudo quantitativo, transversal e controlado, realizado no Hospital de Olhos Francisco Vilar, Piauí, Brasil. Participaram 56 idosos (37 mulheres, 19 homens) sem condições associadas a modificações nos níveis de zinco ou aumento do risco de catarata. Escore > II foi utilizado para definir a presença de catarata, de acordo com o Lens Opacities Classification System II. As concentrações de zinco foram determinadas por espectrometria de absorção atômica em chama. Análise estatística incluiu os testes t de Student e qui-quadrado e 0,05 como nível de significância. RESULTADOS: Catarata senil foi identificada em 58,9% dos participantes, predominando o tipo nuclear (51,8%), seguido pelo cortical (26,8%) e subcapsular posterior (8,9%). Deficiência de zinco no plasma (<70 μg/dL) e no eritrócito (<40 μg/gHb) foi constatada em 49,1% e 30,4% dos idosos, respectivamente. Não houve diferenças significativas entre portadores e não-portadores de catarata, independente do tipo, quanto às concentrações de zinco plasmático (p=0,165) ou eritrocitário (p=0,426). CONCLUSÃO: Deficiência de zinco no plasma ou eritrócito foi comum entre os idosos; porém, os dados indicam não haver diferenças significativas nos referidos parâmetros quanto à presença de catarata senil, independente do tipo.

PURPOSE: To determine plasma and erythrocyte zinc concentrations in elderly with and without senile cataract in a tertiary eye care center at Teresina-Piauí. METHODS: A quantitative, transversal and controlled study was developed at the Hospital de Olhos Francisco Vilar, Piauí, Brasil. Fifty-six elderly subjects (37 females, 19 males) with no known conditions that modify zinc blood levels or increase risk of cataract were included. A score >II was used to define cataract, according to Lens Opacities Classification System II. Plasma and erythrocyte zinc concentrations were determined by flame atomic absorption spectrometry. Statistical tests included Student's t and chi-square tests, with a probability level of 0.05 as significant. RESULTS: Senile cataract was present in 58.9% of the subjects. The most common type was nuclear (51.8%), followed by cortical (26.8%) and posterior subcapsular (8.9%). Zinc deficiencies in plasma (<70 μg/dL) and erythrocyte (<40 μg/gHb) were found in 49.1% and 30.4% of participants, respectively. There were no significant differences between elderly with or without cataract, regardless of type, in relation to plasma (p=0.165) or erythrocyte (p=0.426) zinc concentrations. CONCLUSION: Zinc deficiency in plasma or erythrocyte were common among the elderly. However, the data suggest that no significant differences exist between elderly with or without senile cataract, regardless of type, in relation to the referred parameters of zinc evaluation.

OBJETIVO: Estabelecer as freqüências das especificidades HLA-A, B, DRB1 e DQB1 numa amostra de mestiços da cidade de Teresina, Piauí, para caracterizar a sua composição genética. MÉTODOS: A reação em cadeia da polimerase de seqüência de "primers" específicos (PCR-SSP) foi utilizada para determinar as especificidades HLA-A, B, DRB1 e DQB1 de 97 indivíduos mestiços, saudáveis e não relacionados da cidade de Teresina. A freqüência genotípica foi estimada e comparada com aquelas descritas em amostras de brasileiros caucasianos, portugueses, negros e índios utilizando a Análise de Componente Principal (PCA) e a Análise de Agrupamento Hierárquico (HCA). RESULTADOS: A freqüência das especificidades HLA-A, B, DRB1 e DQB1 observada na amostra de Teresina foi intermediária entre os caucasianos e negros e não foi observada freqüência elevada das especificidades típicas de populações ameríndias. A PCA e HCA demonstraram que os mestiços de Teresina estão muito próximos aos caucasianos e negros e não apresentam similaridades com os índios. CONCLUSÃO: A composição genética do mestiço de Teresina é predominantemente bi-híbrida de genes de origem caucasiana e negra com pouca participação de genes indígenos.

OBJECTIVE: To establish the frequencies of HLA-A, B, DRB1 and DQB1 specificities in a racially admixed sample of the city of Teresina, Piaui to characterize its genetic composition. METHODS: Polymerase chain reaction-sequence specific primers (PCR-SSP) were used to determine HLA-A, B, DRB1 and DQB1 specificities of 97 unrelated healthy racially admixed people of Teresina. The genotypic frequencies were estimated and compared to those described in samples of Brazilian Caucasian, Portuguese, Black and Amerindian populations using Principal Component Analysis (PCA) and Hierarchical Cluster Analysis (HCA). RESULTS: The frequencies of HLA-A, B, DRB1 and DQB1 specificities observed in the study sample were intermediate between Blacks and Caucasians and the typical elevation of HLA-specificities seen in the Amerindian race was not observed in the study population. The PCA and HCA analysis revealed that Teresina's racially admixed are very close to both Black and Caucasian and do not show similarities with the Amerindians. CONCLUSION: The genetic composition of Teresina's racially admixed is predominantly bi-hybrid of genes originated from Blacks and Caucasians with little contribution from Amerindian genes.

A vacinação com antígeno de superfície do vírus da hepatite B não tem eficácia satisfatória em pacientes hemodialisados. O objetivo do estudo foi investigar uma possível associação entre antígenos leucocitários humanos e a baixa capacidade de produção de anticorpos protetores (anti-HbS) contra o antígeno de superfície do vírus da hepatite B em pacientes renais crônicos de programa de hemodiálise. Os antígenos HLA DR e DQ foram determinados em 76 pacientes hemodialisados por meio da técnica clássica de microlinfocitotoxicidade. Os resultados demonstraram que 34,2% dos pacientes eram não-respondedores à vacina VHB. As especificidades HLA mais freqüentes foram: HLA-DR3, DR7 e DQ2, com associação significante para a especificidade HLA-DR3 (p=0,0025; OR 5,1; IC95% 1,36-19,10). Estes dados sugerem a associação dos genes HLA de classe II com a incapacidade de resposta humoral à vacina VHB.

Vaccination using surface antigen from hepatitis B virus has not been successfully responded by hemodialysis patients. The present study was aimed at assessing a possible relationship between human leukocyte antigens and the low production of protective antibodies (anti-HbS) against the surface antigen from hepatitis B by patients with chronic renal failure submitted to hemodialysis programs. The antigens HLA-DR and HLA-DQ were identified in 76 hemodialysis patients through classic microlymphotoxicity. Our results showed that 34.2% of the patients were non-responsive to the vaccine VHB. The most frequent HLA specificity were: HLA-DR3, DR-7 and DQ2 with a significant association for HLA-DR3 (p=0.0025; OR 5.1; IC 95% 1.36-19.10). Such data suggest an association between genes from HLA class II antigens and the humoral non-response to the vaccine VHB.

The present paper reports a laboratory investigation performed between the years of 2000 and 2002 to stydy a virological surveillance program introduced in the state of Piauí to support an epidemiological survey of the disease. Dengue virus type 3 (DENV-3) existence in the state was detected in May 2002 when a high number of dengue cases due to DENV-1 and DENV-2 were reported. An assessment on the population knowledge about the disease and its transmission showed that almost 50% of the population were still unaware of the epidemiological features of dengue.